离子色谱法测定橡胶中的全硫含量,高温裂解前

作者:企业文化

中国橡胶网讯 株洲时代新材料科技股份有限公司研究员采用氧弹燃烧-离子色谱法对橡胶中全硫含量进行测定。试验结果表明,试样分解环境和检测条件对全硫含量的测定影响很大。通过优化试验得出的操作条件为:充氧压力为2.0MPa,充氧时间为1-3min,吸收液为20Ml2%过氧化氢水溶液。色谱工作条件为:淋洗液为4.5mmol/LNa2CO3,1.4mmol/LNaHCO3混合水溶液,流速1mL/min,进样量10μL。在此条件下所得色谱标准曲线线性相关系数SO42-为0.9993,方法加标回收率为95%-105%,相对标准偏差小于1.5%。该方法对橡胶制品中全硫含量的检测具有较高的灵敏度和精确度,且具有选择性好,操作简单,对环境友好等特点,适合橡胶中全硫含量的测定。

2.3 色谱条件

中国化工仪器网 本网视点】高温裂解前处理技术在离子色谱检测中的应用很广,是离子色谱的一类很重要的前处理方法。该方法对有机质样品具有针对性,有机质样品通过相应的高温裂解方法处理后,其中的特殊元素被燃烧、氧化、分解、吸收转化。后将吸收液置于离子色谱仪中进行检测,得到相应元素或物质的含量。 高温裂解前处理技术主要分为氢弹燃烧法、氧瓶燃烧法、高温燃烧炉和微波氧燃烧技术四大类。其中,氢弹燃烧法一般是通过充氧、点火、燃烧吸收、排放、检测者及步骤实现的。其特点是不受燃烧过程中出现的高温和费实行产物的影响,能承受充氧压力和燃烧过程中产生的瞬间高压,试验过程中能保持完全气密以及燃烧结束后,只需晃动氧弹,就能使燃烧气充分吸收。此外,氢弹燃烧法还能保证燃烧气和燃烧残渣都被吸收液溶解吸收,后只需用离子色谱仪检测吸收液中转移出的相关离子即可。 氧瓶燃烧法则是将有机药物置于充满氧气的燃烧瓶中进行燃烧,等燃烧产物被吸入吸收液后,将吸收液取出,防止在离子色谱仪中检测卤素或硫等元素的含量。氢弹和氧瓶燃烧的缺点都在于燃烧过程的不可控,且操作繁琐,会引入污染,一般只能采用离线的方式进行检测。 而目前推出的高温燃烧炉-离子色谱联用技术,则有了很大改进。高温燃烧炉方法,简化了样品全处理过程,与IC联用可迅速完成有机质样品的处理与检测,拓宽了离子色谱的应用范围。高温燃烧炉方法能够检测的样品形态包括固体、液体和气体,其应用领域包括石油化工产品(原油、柴油、汽油、石脑油、润滑油等)、煤化工(煤炭、煤焦油、各种煤化工产品)、环境(土壤、塑料垃圾、固废物、水中有机卤素等)、药物(原料药、合成药物、有机溶剂)、材料(铁矿石、聚合物、橡胶、合成材料、有机无机材料)等。 高温燃烧炉与离子色谱联用技术实现了有机质样品的快速前处理和检测。该方法主要特点在于一次进样可同时检测多种元素、可通过特定元素分析检测相应痕量杂质。此外,高温燃烧炉与离子色谱联用技术还具有空白低、重复性好、分析速度快、分析元素浓度范围宽等优势。 微波氧燃烧法是通过将样品和滤纸放到支架上,再将燃烧罐充氧,开启微波辐射,引燃滤纸和样品,待到吸收液在反应罐内充分回流后,冷却,移出待测。微波氧燃烧法的特点主要有:称样量大,样本代表性强;微波氧燃烧具有批量处理样品的优势,可以同时处理八个样品;微波氧燃烧时间短;反应完全,而且完毕后有回流过程,大大增加了样品中待测元素的回收率;应用范围广,可以处理多种样品,固体和液体;对易挥发元素的处理有优势。微波氧燃烧法的应用领域包括原油、橡胶、土壤、水泥、烟草、生物、食品和聚合物等。 微波氧燃烧是一种绿色、的前处理技术。微波氧燃烧处理时间短,温度可控,能够同时批量处理8个样品。微波氧燃烧与离子色谱技术相结合为样品中卤素等特定元素的检测,开创了一个新的思路,是一种全新的处理和检测方法。 离子色谱在阴阳离子检测方面具有检测速度快、灵敏度高等优势。但随着有机质物质的检测需求的不断上升,建立科学的前处理方法已迫在眉睫。高温裂解技术具有样品处理自动快速、操作简单、重复性好等优点。未来,随着高温裂解前处理技术的发展,离子色谱在煤、石油、环境监测、化工原料、生物质等领域的应用也将愈加广泛。

3.5.3 灌服泻心汤沉淀物后测定不同时间内血浆中小檗碱的浓度

色谱柱:Kromasil-100C18(150mm×4.0mm)分析柱,YWG-C18(50mm×4.6mm)保护柱,流动相:0.2mol.L-1酒石酸(内含0.5%十二烷基硫酸钠)-甲醇,流速:1.0mL.min-1,柱温:室温,检测波长:270nm,灵敏度:0.08AUFS。

用1%CMC-Na水溶液将泻心汤沉淀物(经测定,每100mg沉淀物中含6.651mg盐酸小檗碱)配成25mg.mL-1的混悬液,将24只小鼠分成8组,以250mg.kg-1的量给小鼠口服灌胃泻心汤沉淀物的混悬液,于灌胃后的30min及1、2、3、4、6、8、24h的8个时间段断头取血,枸橼酸钠抗凝,取血浆0.2mL依前法进行操作,测定不同时间时血浆中小檗碱的含量,同一血样测定3次。结果,在灌服泻心汤沉淀物后24h内的各个时间段,均未能从血浆中测出小檗碱。

按照前文已报道的方法,每种化合物(小檗碱、巴马丁碱、黄连碱、药根碱)先用流动注射方式以MS及MS/MS进行试验,以确定其前体离子(precursorion),并选择产生离子以及仪器操作条件,以便随后用LC/MS/MS模式进行多重反应监控实验[multiplereactionmonitoringexperiment],将泻心汤沉淀物的结果与标准图谱比较,确定泻心汤沉淀物中含有小檗碱、巴马丁碱、黄连碱、药根碱。

3.4 液相色谱条件

按泻心汤中药材量的配比关系:大黄-黄连-黄芩,分别称取大黄、黄连、黄芩各一定量,先后加4倍及2倍的水,煎煮2次,煎煮时间第一次为40min,第二次为30min,第一次煎煮前先用水浸泡30min,4层纱布过滤,合并2次滤液,置冰箱中过夜,次日离心过滤,弃去上清液,加水反复洗沉淀至水无色,干燥后备用。

核心提示: 摘要目的:用LC/MS/MS和RP-HPLC法研究泻心汤煎煮产生的沉淀物。 方法:利用LC-MS-MS法对

3、沉淀物中小檗碱的体内吸收实验

Y=3.548X+0.818r=0.9993

2.5 结果

3.5.1 样品处理

3.5.2 血浆中小檗碱的标准曲线及回收率

结果:发现其中含有小檗碱、巴马丁碱、黄连碱、药根碱,但在给小鼠灌服泻心汤沉淀物后24h内的几个时间段中,均未能从血浆中测到小檗碱。

结论:泻心汤沉淀物进入体内后小檗碱并未进入血液,推测如果泻心汤沉淀物具有活性,估计也只可能在胃肠道起作用。

摘要目的:用LC/MS/MS和RP-HPLC法研究泻心汤煎煮产生的沉淀物。

沉淀物先溶解在二甲基亚砜中,再用甲醇-水溶液稀释成10μg.mL-1。

人们已经注意到中药中很多药物之间,如甘草与芒硝、麻黄、黄芩、黄连之间,大黄与茵陈、双花之间,苦参与大黄、黄芩、栀子之,以及一些常用方剂,如泻心汤、葛根黄芩黄连汤、白头翁汤在煎煮时都会出现浑浊,产生沉淀,且在服用汤剂时,患者喝进的汤药,实际大多是一些含有沉淀物的混悬液。那么,这些沉淀物中都含有什么成分,进入体内后,是否会被吸收进入血液而发挥药效作用呢?为此,我们选择了中药复方中的经典方“泻心汤”对其沉淀物进行了研究。

将小檗碱用流动相逐步稀释进样,以血浆为背景空白,当S/N为2时,小檗碱的最低检测量为6ng。

用枸橼酸钠抗凝采血后,离心分离出血浆,取不同浓度的盐酸小檗碱标准溶液各20μL,分别加入内标溶液40μL,放入带塞的离心管中挥干,加血浆0.2mL,18%的十二烷基硫酸钠水溶液40μL,氯仿2mL,振荡离心后,弃去上清液,取下层氯仿液1.8mL,氮气吹干,残渣加100μL无水乙醇溶解,待测。

2.2 样品液的准备

3.3 生物样品的制备

精密称取硫酸奎尼丁3.553mg,用无水乙醇配成35.53ng.μL-1内标溶液。

2.1 泻心汤沉淀物的制备

用血浆配制每1mL含小檗碱6.76、15.34、23.01、30.68μg的样品,按标准曲线项下进行操作,取10μL进样,计算实测值占加入值的百分率即得回收率。结果见表2。

小檗碱在0~30.68ng的范围内与峰面积之比呈线性关系。

在对泻心汤沉淀物的初步薄层色谱分离试验发现,沉淀物中含有许多成分,考虑到用LC/MS/MS仪对分析样品可以直接分离,不需要提纯,又能根据所得的质谱资料确定出结构等方面的优势,首次利用LC/MS/MS仪对泻心汤沉淀物进行了某些成分的结构鉴定,结果发现其中含有黄连中的4种生物碱:小檗碱、巴马丁碱、黄连碱、药根碱。用这种仪器分析样品简便、快速,本实验也表明用它来研究成分复杂、提取分离工作量又大的中药来说,是一种更适合的分析手段。进一步将沉淀物给小鼠灌服,在其后的24h内的几个时间段中,均未能从血样中测到小檗碱。由此推测小檗碱以泻心汤沉淀物的形式可能无法进入血液中发挥作用。由于考虑到泻心汤在临床上的实际服用量,故在动物实验中未设其它剂量组。我们认为,泻心汤沉淀物中的小檗碱如果具有活性,应该也只能是在胃肠道起作用,因为胃液是酸性有利于小檗碱溶解,肠道是碱性使之不易吸收,小檗碱对肠道消炎作用可能是直接在肠道作用。再者,考虑到小檗碱在体内吸收较差,可以进一步选择泻心汤沉淀物中的其它成分来观察它们的体内吸收情况,并配合药理实验,以便最终确定沉淀物在泻心汤治疗全身性疾病时存在的必要性。

2.4 质谱条件

3.1 标准溶液

质谱仪校准方式:聚丙烯二醇溶液校准,离子化方式:高流速的离子喷雾,加热电离温度:450℃,电离电压:5500V,喷雾压力:275kPa,辅助气体流速:6.0L.min-1,屏障气体(curtaingasflow)流速:2.0L.min-1。

1、材料与仪器

精密称取盐酸小檗碱0.767mg,用无水乙醇配成6.76、15.34、23.01、30.68μg.mL-1的标准溶液。

精密吸取0.3835mg.mL-1小檗碱储备液适量,配成不同浓度的标准溶液,各取20μL,按样品处理项下进行操作,取10μL进样。将所得结果以小檗碱的浓度为横坐标,小檗碱与内标的峰面积之比为纵坐标作图,得小檗碱在血浆中的标准曲线,并求出回归方程为:

3.5 结果

小鼠断头取血,枸橼酸钠抗凝,离心取血浆。取0.2mL放入带塞的离心管中,加入18%十二烷基硫酸钠水溶液40μL,内标溶液40μL,氯仿2mL,振荡离心15min后,弃去上清液,取下层氯仿液1.8mL,氮气吹干,残渣加无水乙醇100μL溶解,取10μL进样。

PE-SCIEXAPI365型LC/MS/MS联用仪;Waters510型输液泵,岛津SPD-2A紫外检测器,岛津C-R3A积分仪;盐酸小檗碱、巴马丁碱、黄连碱、药根碱:中国药品生物制品检定所;硫酸奎尼丁,BDH,为本室何丽一教授赠;十二烷基硫酸钠,北京东环联合化工厂;其它试剂均为分析纯。大黄(蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.),黄连(毛莨科植物黄连CoptischinensisFranch),黄芩(唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi)购于市药材公司,并经我所植物室陈毓亨教授鉴定。18~22g♂昆明种小鼠,中国医学科学院动物所饲养场。

2、沉淀物化学成分的定性实验

4、讨论

方法:利用LC-MS-MS法对泻心汤沉淀物进行了初步研究,又利用RP-HPLC法,测定了泻心汤沉淀物中小檗碱在小鼠体内的吸收。

色谱柱:YMC-C18分析柱(2.0mm×50mm),流动相:含有2mmol.L-1醋酸铵及0.2%甲酸的水;含有2mmol.L-1醋酸铵及0.2%甲酸的甲醇,流速:200μL.min-1,梯度条件:开始25%B、75%A,30min后90%B、10%A,进样量:10μL。

3.2 内标溶液

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